酶聯(lián)免疫試劑盒應嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結果。首先應選取的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證酶聯(lián)免疫試劑盒檢測結果準確可靠的必要條件。所以酶聯(lián)免疫試劑盒試劑盒的購買，試劑質量的保證以及實驗前實驗儀器的檢察都是很重要的。

　　1、標本的采集及保存：

　　①、血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃經(jīng)過一夜夜后于1000x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　②、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8°C1000x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　③、細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　④、樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10，000倍。

　　

　　2、試劑的準備：

　　按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑，酶聯(lián)免疫試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的，自配的緩沖液應用pH計測量較正，從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

　　

　　3、加樣：

　　分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　

　　4、溫育：

　　用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　

　　5、洗滌：

　　小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　

　　6、顯色：

　　每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　

　　7、測定：

　　以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。