ER2566感受態細胞

產品規格CAT#: BFNC86085-01(10×100ul)/BFNC86085-02(50×100ul)

ER2566：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質期)：                             -80℃（6個月）

基因型

F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]

產品說明

ER2566菌株是NEB公司開發的具有超高轉化效率的蛋白表達原核菌株，來源于BL21。Lac啟動子啟動下游T7RNA聚合酶的表達，可用于T7啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達。fhuA2賦予ER2566菌株對噬菌體T1的抗性。同時ER2566為lon 和 ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能夠有效抑制表達的異源蛋白在大腸桿菌體內的降解，Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突變的存在使ER2566菌株無法對外源DNA進行標記、限制，提高了外源甲基化DNA的轉化效率。

青旗生物的ER2566感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1.ER2566感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

ER2566感受態細胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.  

注意事項

1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。